真菌形態(tài)學(xué)檢查方法
菌落形態(tài)觀察
1
直接鏡檢
KOH涂片,生理鹽水涂片。
2
染色檢查
墨汁涂片、乳酸酚棉蘭染色、派克墨水染色、革蘭氏染色、抗酸染色、吉姆薩染色、過(guò)碘酸-希夫染色(PAS)。
3
組織病理染色
HE,PAS,嗜銀染色,瑞氏染色等熒光檢查:熒光顯微鏡下直接熒光劑涂片后觀察。
真菌鏡檢的臨床意義
在無(wú)菌體液標(biāo)本中直接鏡檢發(fā)現(xiàn)真菌成分??纱_立深部真菌病的診斷;但在有菌部位則一般只有發(fā)現(xiàn)大量(最好是多次)真菌菌絲方可作出診斷。
通過(guò)直接鏡檢發(fā)現(xiàn)特征性的真菌結(jié)構(gòu)可幫助鑒定菌種或?qū)?一般可區(qū)分念珠菌、青霉、曲霉、接合菌、鐮刀菌、著色真菌(鏈隔孢)、隱球菌、馬拉色菌、無(wú)綠藻等的感染。
提示真菌的致病性、活動(dòng)性:如念珠菌出現(xiàn)菌絲。
常見(jiàn)致病型酵母菌形態(tài)學(xué)
白色念珠菌
白色念珠菌在沙保培養(yǎng)基上呈現(xiàn)奶油色,光滑的外表。
隱球菌
隱球菌菌落形態(tài)
墨汁染色:鏡下
常見(jiàn)致病絲狀真菌形態(tài)
曲霉
左起:煙曲霉,黃曲霉,黑曲霉
1
煙曲霉
菌落-深綠色/煙綠色絲絨樣表面,鏡下-分生孢子頭為短柱狀,頂囊燒瓶狀,單層小梗,分布于頂囊上半部分,分生孢子球形。
2
黃曲霉
菌落-黃綠色/棕綠色羊毛狀/棉毛狀質(zhì)地,有放射狀溝紋,鏡下-分生孢子頭開(kāi)始呈放射狀,逐漸變?yōu)槭杷蔂?,頂囊球形或近球形,小??蓡螌?雙層,布滿頂囊表面,放射狀排列,分生孢子球形或近球形。
3
黑曲霉
菌落-初為白色到黃色,最后變?yōu)楹谏?,羊毛?絨毛狀質(zhì)地,鏡下-分生孢子頭放射狀,頂囊球形/近球形,小梗雙層,密生于頂囊全部表面,分生孢子球形。
雙相真菌
馬爾尼菲青霉
菌絲相
菌絲相:25℃,2周后成熟菌落呈玫瑰紅色蠟樣,有腦回樣皺紋及放射狀溝紋,產(chǎn)生紅色色素滲入基質(zhì)。鏡下可見(jiàn)無(wú)色透明、分隔菌絲,分生孢子梗光滑而無(wú)頂囊,單鏈分生孢子,散亂分布。
酵母相:37℃,無(wú)色素產(chǎn)生。鏡下可見(jiàn)表面光滑、圓形/橢圓形/長(zhǎng)形酵母細(xì)胞,裂殖而非芽生,也可見(jiàn)短菌絲。
通過(guò)上述菌落形態(tài)特征描述,染色、鏡檢可以把常見(jiàn)致病真菌進(jìn)行分類,對(duì)我們認(rèn)識(shí)掌握常見(jiàn)致病真菌具有重要的幫助和指導(dǎo)。